产品货号：
RFT098
中文名称：
Long Taq DNA聚合酶
英文名称：
Long Taq DNA Polymerase
产品规格：
500U|5×500U
发货周期：
1～3天
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本制品是由pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成。两种酶协同作用实现了扩增效率、合成速度和延伸性能的完美统一，在长片段PCR反应中具有独特的优势，可以合成超长的DNA片段。另外，此酶具有比Taq DNA聚合酶约5倍的PCR可信度。Long Taq DNA聚合酶的大多数PCR扩增产物3'端带碱基A，可以通过TA克隆法进行克隆。
短链和长链DNA扩增，特别适合于长片段DNA的PCR扩增。
一个活性单位是指74℃条件下，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
| 组分 | 500U | 5×500U |
| Long Taq DNA Polymerase(5U/μL) | 100μL | 5×100μL |
| 10×Long Taq PCR buffer(含Mg2+) | 1mL | 5×1mL |
| 2×GC buffer | 2×1mL | 10×1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
50mM Tris-HCl(pH8.0)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50mM KCl，Stabilizers，50% glycerol。
- 按照下表在0.2mL PCR管中制备反应体系：
成分 用量 终浓度 模板 0.1～1μg as you wish Primer 1(10μM) 1μL 200nM Primer 2(10μM) 1μL 200nM 10×Long Taq PCR buffer 5μL 1× dNTP Mixture(10mM) 1μL 200μM each Long Taq DNA聚合酶(5U/μL) 0.5～1μL 2.5～5U ddH2O 至50μL - - 混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
- PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μL矿物油。
- PCR仪上执行以下程序：
- 三步法：
步骤 温度 时间 循环数 初始变性 94℃ 1～5min 1 变性 94℃ 30sec 25～40 退火 Tm-5℃ 30sec 延伸 72℃ 1min/kb 最后延伸 72℃ 5min 1 - 两步法：
步骤 温度 时间 循环数 初始变性 94℃ 1～5min 1 变性 94℃ 30sec 25～40 退火和延伸 68℃ 1min/kb 最后延伸 72℃ 5min 1
- PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
- 三步法：
以λ DNA为模板，配合10×Long Taq PCR buffer，可以很好扩增20kb DNA片段。
以水稻基因组做模板，配合10×Long Taq PCR buffer可以很好扩增PEPCase 5.2kb DNA片段。
- Long Taq DNA聚合酶能扩增多长片段？
对简单模板（如λ噬菌体做模板），可以扩增20kb片段；对复杂模板（如基因组DNA），可以扩增8kb片段。 - Long Taq DNA聚合酶保真性怎样？
Long Taq含有3'-5'校对活性的聚合酶，有校对功能。保真性为普通Taq酶的5倍。 - Long Taq DNA聚合酶是否只能扩增长片段？
Long Taq也能很好的扩增低于5kb的片段，只是在长片段扩增中更有优势。 - 进行长片段PCR时，为什么推荐使用2阶段温度PCR法？
长片段PCR扩增时要设计比较长的引物，以增加引物的特异性，而长引物的Tm比较高。在进行长片段PCR时，退火温度和延伸温度间的差距很小，当退火温度超过60℃时，退火温度和延伸温度可以设定为一个温度，一般为68℃，这样进行2阶段温度PCR，在长片段PCR中能得到更好的效果。 - 使用Long Taq DNA聚合酶的扩增产物是否可以进行TA克隆？
由于使用Long Taq得到的PCR产物大多数带有A，可以进行TA克隆。然而，如果想提高TA克隆的连接效率，建议加A后再进行TA克隆。 - Long Taq DNA polymerase可以扩增高GC含量片段吗？
要扩增高GC含量片段，建议使用Long Taq配合2×GC buffer使用；不建议使用10×Long Taq buffer。
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